Your browser does not support JavaScript!

Πτυχιακές εργασίες

Τρέχουσα Εγγραφή: 5 από 219

Πίσω στα Αποτελέσματα Προηγούμενη σελίδα
Επόμενη σελίδα
Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Τίτλος Δημιουργία στελεχών Pichia pastoris για την ετερόλογη έκφραση πρωτεϊνών γλυκιάς γεύσης
Συγγραφέας Βουγιατζή, Αικατερίνη Σταυρούλα
Σύμβουλος διατριβής Παυλίδης, Ιωάννης
Περίληψη Ένα από τα δημοφιλέστερα συστήματα έκφρασης ετερόλογων πρωτεϊνών είναι ο μεθυλότροφος ζυμομύκητας Pichia pastoris. Αξιοποιώντας το μεταβολικό μονοπάτι της ζύμης για το μεταβολισμό της μεθανόλης (Methanol Utilization pathway, MUt), και συγκεκριμένα την ιδιότητα του προαγωγέα του ενζύμου της οξειδάσης της αλκοόλης (AOX) να ενεργοποιείται μόνο όταν η μεθανόλη βρίσκεται στο περιβάλλον του κυττάρου, μπορεί να πραγματοποιηθεί η αυστηρά ρυθμιζόμενη από μεθανόλη έκφραση ετερόλογων πρωτεϊνών. Ώντας ευκαρυωτικός μικροοργανισμός, η P. pastoris προσφέρει ένα πιο σύνθετο σύστημα έκφρασης πρωτεϊνών, σε σχέση με βακτηριακούς ξενιστές όπως το E. coli, ενώ παράλληλα όντας ζύμη, είναι πιο φθηνό και λιγότερο χρονοβόρο σύστημα από κύτταρα θηλαστικών. Στο πλαίσιο της παρούσας ερευνητικής εργασίας πραγματοποιήθηκε η προσπάθεια ετερόλογης έκφρασης πέντε υποθετικών και δύο γνωστών γλυκών πρωτεϊνών σε σύστημα P. pastoris. Το πρώτο βήμα ήταν ο μετασχηματισμός τους στελέχους GS115 της ζύμης με γραμμικό πλασμιδιακό φορέα pPIC9K. Στα επόμενα βήματα, προσδιορίστηκε ο φαινότυπος MUts ή MUt+ των αποικιών μέσω πειραμάτων ανάπτυξης των μετασχηματισμένων κυττάρων σε στερεές καλλιέργειες υπό συγκεκριμένες συνθήκες, αλλά και ο γονότυπός τους, μέσω ανίχνευσης των επιθυμητών γονιδίων στο γονιδίωμα της ζύμης με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR). Τέλος, παρασκευάστηκαν καλλιέργειες με στόχο την έκφραση των πρωτεϊνών ενδιαφέροντος και έγιναν προσπάθειες απομόνωσής τους μέσω χρωματογραφίας συγγένειας. Μέσω της τεχνικής ηλεκτροφήρησης σε αποδιατακτικές συνθήκες (SDS-PAGE), παρατηρήθηκε η έκφραση των δύο πρωτεϊνών Μab II και MNEI, αλλά σε πολύ χαμηλές αποδόσεις.
Γλώσσα Ελληνικά
Ημερομηνία έκδοσης 2022-11-24
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Χημείας--Πτυχιακές εργασίες
  Τύπος Εργασίας--Πτυχιακές εργασίες
Μόνιμη Σύνδεση https://elocus.lib.uoc.gr//dlib/7/d/6/metadata-dlib-1667896608-517701-9912.tkl Bookmark and Share
Εμφανίσεις 49

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Κατέβασμα Εγγράφου
Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 2