E-Locus - Institutional Repository of the University of Crete

Home Collections Type of Work Post-graduate theses

Post-graduate theses

Current Record: 8 of 5933

[Add to Basket]

Identifier

000452375

Title

Exosomal miRNAs as potential biomarkers of Myelodysplastic Syndromes

Alternative Title

Τα εξωσωμικά miRNAs ως πιθανοί βιοδείκτες των Μυελοδυσπλαστικών Συνδρόμων

Author

Ντρετάκη, Αγάπη Στυλιανή

Thesis advisor

Ποντίκογλου, Χαράλαμπος

Reviewer

Παπαδάκη, Ελένη
Καλπαδάκη Χριστίνα

Abstract

Background: Increasing evidence have demonstrated that exosomal microRNAs are promising noninvasive biomarkers for various cancer types, including certain hematological malignancies. Objective: In this specific study we aimed to optimize a protocol for exosomal miRNAs’ isolation that could be used for the identification of potential minimally-invasive biomarkers of MDS. Methods: Serum and Plasma samples were collected from healthy individuals, as well as MDS patients at different therapy stages. Exosomes have been isolated from selected samples and moreover, exosome quantification and visualization were performed, with the use of Elisa assay, Western Blot and TEM respectively. Finally, a variety of commercial kits have been tested for the optimization of exosomal RNA isolation. Results: Exosome quantification has proven that exosomes are isolated properly, however TEM has indicated that besides exosomes samples might be contaminated with other EVs or cellular waste as well. Isolated RNA was in general of poor quality and quantity both in healthy individuals and MDS patients. However, plasma was chosen as the optimal biological fluid for exosomal RNA isolation and 200μl as the optimal volume for total RNA isolation. Conclusions: Either a dilution step or an extra purification step should be performed for better exosome characterization. Moreover, exosome isolation should be performed prior to sample freezing, in case sample’s quality is interfering with exosome release. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ Ιστορικό: Αυξανόμενες ενδείξεις έχουν δείξει ότι τα εξωσωματικά microRNAs είναι πολλά υποσχόμενοι μη επεμβατικοί βιοδείκτες για διάφορους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων ορισμένων αιματολογικών κακοηθειών. Στόχος: Στη συγκεκριμένη μελέτη στοχεύσαμε στη βελτιστοποίηση ενός πρωτοκόλλου για την απομόνωση εξωσωματικών miRNAs που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την ταυτοποίηση πιθανών ελάχιστα επεμβατικών βιοδεικτών για τα MDS. Μέθοδοι: Συλλέχθηκαν δείγματα ορού και πλάσματος από υγιή άτομα, καθώς και από ασθενείς με MDS σε διαφορετικά στάδια θεραπείας. Τα εξωσώματα απομονώθηκαν από επιλεγμένα δείγματα και, επιπλέον, πραγματοποιήθηκε ποσοτικοποίηση και απεικόνιση των εξωσωμάτων με τη πραγματοποίηση δοκιμασίας Elisa, Western Blot και TEM αντίστοιχα. Τέλος, δοκιμάστηκαν διάφορα εμπορικά kits για τη βελτιστοποίηση της απομόνωσης εξωσωματικού RNA. Αποτελέσματα: Η ποσοτικοποίηση των εξωσωμάτων απέδειξε ότι τα εξωσώματα απομονώνονται σωστά, ωστόσο η TEM έδειξε ότι εκτός από εξωσώματα τα δείγματα μπορεί να είναι μολυσμένα και με άλλα EVs ή κυτταρικά απόβλητα. Το απομονωμένο RNA ήταν γενικά κακής ποιότητας και ποσότητας τόσο σε υγιή άτομα όσο και σε ασθενείς με MDS. Ωστόσο, το πλάσμα επιλέχθηκε ως το βέλτιστο βιολογικό υλικό για την απομόνωση εξωσωμικού RNA και τα 200μl ως ο βέλτιστος όγκος για την απομόνωση ολικού RNA. Συμπεράσματα: Για τον καλύτερο χαρακτηρισμό των εξωσωμάτων θα πρέπει να πραγματοποιείται είτε ένα στάδιο αραίωσης είτε ένα επιπλέον στάδιο καθαρισμού. Ακόμα, η απομόνωση των εξωσωμάτων θα πρέπει να πραγματοποιείται πριν από την κατάψυξη του δείγματος, σε περίπτωση που η ποιότητα του δείγματος παρεμποδίζει την απελευθέρωση των εξωσωμάτω

Language

English

Subject

Circulating miRNAs

Exosomes

Βιοδείκτες

Εξωσώματα

Κυκλοφορούντα miRNAs

Issue date

2022-12-07

Collection

School/Department--School of Medicine--Department of Medicine--Post-graduate theses