E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης

Αρχική Αναζήτηση

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Εντολή Αναζήτησης : Συγγραφέας="Ζαννής" Και Συγγραφέας="Βασίλειος"

Τρέχουσα Εγγραφή: 6 από 13

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000358521

Τίτλος

Functional characterization of naturally occuring APOA-I mutations found in the Copenhagen city heart study : a substitution L144R in APOA-I results in abnormal HDL phenotype that can be corrected with treatment with LCAT

Άλλος τίτλος

Χαρακτηρισμός δύο φυσικών μεταλλάξεων της ΑΠΟΑ-I που εντοπίστηκαν κατά την επιδημιολογική μελέτη του πληθυσμού της Κοπενχάγης :

Συγγραφέας

Κατεϊφίδης, Ανδρέας

Σύμβουλος διατριβής

Ζαννής, Βασίλειος

Περίληψη

Η απολιποπρωτεΐνη Α-Ι (αποΑ-Ι) είναι η κύρια πρωτεΐνη των λιποπρωτεϊνών υψηλής πυκνότητας (HDL) και παίζει σημαντικό ρόλο στην βιογένεση, τη δομή, την λειτουργία και την συγκέντρωση της HDL στο πλάσμα. Επιδημιολογικές μελέτες και κλινικές δοκιμές φανερώνουν ότι τα επίπεδα της HDL είναι αντιστρόφως ανάλογα του κινδύνου εμφάνισης στεφανιαίας νόσου στον άνθρωπο. Δύο μεταλλαγμένες μορφές της αποΑ-Ι ανιχνεύθηκαν στην μελέτη του πληθυσμού της πόλης της Κοπεγχάγης που είχε στόχο την εύρεση γενετικών παραγόντων που συμβάλουν στην καρδιαγγειακή νόσο. Για να μελετήσουμε τις συνέπειες αυτών των μεταλλάξεων στη βιογένεση της HDL κατασκεύαστηκαν ανασυνδιασμένοι αδενοϊοί που εκφράζουν δύο μεταλλαγμένες μορφές της αποΑ-Ι, αποA-I(L144R) και αποA-I(A164S). Μελέτες σε κύτταρα HTB-13 που μολύνθηκαν με τους ανασυνδιασμένους αδενοϊούς που εκφράζουν τις εν λόγω πρωτεΐνες, έδειξαν ότι τόσο η αποΑ-Ι αγρίου τύπου (WT) όσο και η μεταλλαγμένες μορφές της αποΑ-Ι εκκρίνονται με τον ίδιο ρυθμό στο θρεπτικό υλικό των κυττάρων. Γονιδιακή μεταφορά σε ποντίκια με ανεπάρκεια της αποΑ-Ι (αποΑ-Ι-/-) έδειξε ότι η αποΑ-Ι(L144R) οδήγησε σε χαμηλά επίπεδα ολικής χοληστερόλης και μειωμένο λόγο εστέρων χοληστερόλης προς ολική χοληστερόλη (CE/TC) σε σχέση με αποΑ-Ι-/- ποντίκια που έλαβαν τον αδενοϊό που εκφράζει την αποΑ-Ι αγρίου τύπου ή την αποΑ-Ι(A164S). Η διαφορά στο λόγο CE/TC μεταξύ της αποΑ-Ι αγρίου τύπου και αποΑ-Ι(L144R) δεν μετεβλήθει όταν τα επίπεδα έκφρασης της μεταλλαγμένης μορφής (με βάση τα επίπεδα ηπατικού RNA) ήταν αυξημένα. Κλασμάτωση του πλάσματος με FPLC έδειξε ότι το κλάσμα της HDL σε ποντίκια που εκφράζουν την αποΑ-Ι(L144R) ήταν παρόμοιο με το κλασμα της HDL σε ποντίκια που εκφράζουν την πρωτεΐνη ελέγχου GFP. Κλασμάτωση του πλάσματος με υπερφυγοκέντρηση σε βαθμίδωση KBr έδειξε ότι η αποA-I στα ποντίκια που εκφράζουν την αποA-I(L144R) ήταν μειωμένη και μετατοπισμένη προς την HDL3 συγκριτικά με ποντίκια που εκφράζουν την WT αποA-I ή αποΑ-Ι(A164S). Ανάλυση με ηλεκτρονική μικροσκοπία του κλάσματος της HDL έδειξε ότι η αποΑ-Ι(L144R) οδήγησε στο σχηματισμό λίγων δισκοειδών σωματιδίων καθώς και μικρού μεγέθους σωματιδίων που ήταν όμοια με τα σωματίδια που παρατηρήθηκαν σε ποντίκια που εκφράζουν την πρωτεΐνη ελέγχου GFP. Αντίθετα η WT αποA-I και η αποA-I(A164S) οδήγησαν στο σχηματισμό σφαιρικών σωματιδίων. Ηλεκτροφόρηση δύο διαστάσεων έδειξε ότι η αποA-I(L144R) οδήγησε στο σχηματισμό preβ- και α4-HDL σωματιδίων, ενώ η WT αποA-I και η αποA-Ι(A164S) οδήγησε στο σχηματισμό κανονικών πληθυσμών preβ- και α-HDL σωματιδιων (α1, α2, α3, α4). Ταυτόχρονη χορήγηση αδενοϊών που εκφράζουν την αποA-I(L144R) και την ανθρώπινη LCAT απεκατέστησε τα επίπεδα χοληστερόλης και το λόγο CE/TC. Η χορήγηση LCAT επίσης αύξησε σε κανονικά επίπεδα το κλάσμα της HDL. Κλασμάτωση του πλάσματος με υπερφυγοκέντρηση σε βαθμίδωση KBr έδειξε ότι η αποA-I στα ποντίκια που εκφράζουν την αποA-I(L144R) επανήλθε στα φυσιολογικά επίπεδα μετα τη χορήγηση της LCAT. Επίσης η συγχορήγηση της LCAT οδήγησε στο σχηματισμό σφαιρικών σωματιδίων και απεκατέστησε κανονικούς πληθυσμούς preβ- και α-HDL σωματιδίων. Τα ευρήματα αυτά φανερώνουν ότι η αποA-I(L144R) έχει παθολογικό και η αποA-I(A164S) ομαλό φαινότυπο HDL. Τα πειράματα αυτά επίσης υποδεικνύουν ότι τα χαμηλά επίπεδα HDL στα ποντίκια που εκφράζουν την αποA-I(L144R) οφείλονται σε ανεπάρκεια στην LCAT που αναστέλλει την ομαλή μετατροπή της λιπιδιωμένης αποA-I σε δισκοειδή και εν συνεχεία σε σφαιρικά σωματίδια HDL. Η αποκατάσταση κανονικού φαινοτύπου HDL σε ποντίκια που εκφράζουν την αποA-I(L144R) μετά από χορήγηση LCAT υποδεικνύει πιθανή θεραπεία συνδρόμων που οδηγούν σε ανώμαλους φαινοτύπους HDL και οφείλονται σε συγκεκριμένες μεταλλάξεις της αποA-I.

Φυσική περιγραφή

107 σ. : πιν. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά, Αγγλικά

Θέμα

Apolipoproteins genetics

Απολιποπρωτεϊνες Γενετική

Ημερομηνία έκδοσης

2008-04-03

Συλλογή

Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης