E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης

Αρχική Αναζήτηση

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Εντολή Αναζήτησης : Συγγραφέας="Λογοθέτης" Και Συγγραφέας="Διομήδης"

Τρέχουσα Εγγραφή: 1 από 2

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000449822

Τίτλος

Allosteric regulation of CFTR by membrane phospholipid PIP2

Άλλος τίτλος

Αλλοστερική ρύθμιση του CFTR από το μεμβρανικό φωσφολιπίδιο PIP2

Συγγραφέας

Βυνιχάκη, Ιωάννα Μαρία

Σύμβουλος διατριβής

Λογοθέτης, Διομήδης

Περίληψη

Η Κυστική Ίνωση (ΚΙ) είναι μία θανατηφόρος ασθένεια που προκύπτει από την δυσλειτουργία ή και από την απουσία του Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator ή CFTR. Η πρωτεΐνη αυτή είναι το μοναδικό κανάλι ιόντων στην πρωτεϊνική οικογένεια ABC, μεταφέροντας ιόντα χλωρίου μέσω της κορυφαίας πλασματικής μεμβράνης των επιθηλιακών κυττάρων. Μεταλλάξεις στο γονίδιο του CFTR που προκαλούν ΚΙ μπορεί να οδηγήσουν από ελαττωματική πρωτεϊνική σύνθεση και ωρίμανση μέχρι τη δυσλειτουργική δράση της. Η πιο συνήθης μεταλλαγή είναι αυτή της διαγραφής της φαινυλαλανίνης 508 (ΔF508), που αποτελεί το 70% των περιστατικών. Η δομή του CFTR περιλαμβάνει δυο διαμεμβρανικές περιοχές (TMD1, TMD2), που σχηματίζουν τον πόρο του καναλιού, δυο περιοχές πρόσδεσης νουκλεοτιδίου (NBD1, NBD2) και μία μοναδική ρυθμιστική περιοχή (RD). Το άνοιγμα και το κλείσιμο του καναλιού (gating) θεωρείται ότι ρυθμίζεται από την πρόσδεση ATP στις συντηρημένες NBDs και από τη φωσφορυλίωση της RD. Από την άλλη πλευρά, η 4,5-διφωσφορική φωσφατιδυλοϊνοσιτόλη ή PIP2 είναι ένα μεμβρανικό φωσφολιπίδιο που δρα ως μέγας ρυθμιστής της δράσης καναλιών ιόντων και κατά περίπτωση αποτελεί απαραίτητο στοιχείο για την δράση τους. Σε μία επιστημονική μελέτη του 2004, η PIP2 δείχτηκε να επιδρά στο gating τόσου του μη-φωσφορυλιωμένου όσο και του φωσφορυλιωμένου CFTR. Ωστόσο, από τότε η σχέση μεταξύ CFTR και PIP2 δεν έχει διευκρινιστεί περαιτέρω. Στη παρούσα εργασία παρουσιάζουμε δεδομένα από inside-out, patch-clamp ηλεκτροφυσιολογικά πειράματα σε ωοκύτταρα Xenopus laevis, που εξελίσσουν αυτή τη σχέση σε συγκεκριμένα επίπεδα του κύκλου ενεργοποίησης του CFTR. Έκθεση του CFTR στο υδατοδιαλυτό ανάλογο diC8-PI(4,5)P2 (diC8-PIP2), υπό την παρουσία MgATP, ήταν ικανή να ενεργοποιήσει το μη-φωσφορυλιωμένο κανάλι, καθώς και τον φωσφορυλιωμένο CFTR, τόσο κατά τη διάρκεια όσο και έπειτα από την φωσφορυλίωση από την πρωτεϊνική κινάση Α (PKA). Ενδιαφέρον παρουσίασε το γεγονός ότι η επίδραση του diC8-PIP2 φάνηκε να είναι εξαρτώμενη από το χρόνο εφαρμογής του φωσφολιπιδίου κατά τη διάρκεια της φωσφορυλίωσης από PKA. Η εφαρμογή του κατά τα αρχικά στάδια συνετέλεσε σε σημαντικά υψηλότερη ενίσχυση του ρεύματος χλωρίου, σε σύγκριση με την εφαρμογή του diC8-PIP2 σε μετέπειτα χρόνο στο στάδιο φωσφορυλίωσης του CFTR. Επιπλέον, απομάκρυνση της δράσης της PIP2 με πολυ-L-λυσίνη (PL) οδήγησε σε ενδιαφέροντα αποτελέσματα κατά την εφαρμογή της πριν και κατά τη διάρκεια φωσφορυλίωσης. Το μη- φωσφορυλιωμένο κανάλι ενεργοποιήθηκε υπό την παρουσία ATP και PL, ενώ το πολυκατιόν ήταν ικανό να καταστείλει σημαντικά το ρεύμα του φωσφορυλιωμένου CFTR. Παράλληλα, καθορίσαμε ένα πρωτόκολλο ενεργοποίησης και καταστολής του CFTR με τη whole-cell patch-clamp μέθοδο, που θα μας επιτρέψει να μελετήσουμε περαιτέρω τη σχέση CFTR-PIP2. Συνολικά, υποθέτουμε ότι το gating του CFTR ρυθμίζεται από τη PIP2 με τρόπο εξαρτώμενο από το επίπεδο φωσφορυλίωσης του καναλιού.

Φυσική περιγραφή

32 σ. : εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Fhosphorylation

Φωσφορυλίωση

Ημερομηνία έκδοσης

2022-07-29

Συλλογή

Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης