E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης

Αρχική Αναζήτηση

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Εντολή Αναζήτησης : Συγγραφέας="Πετράτος" Και Συγγραφέας="Κυριάκος"

Τρέχουσα Εγγραφή: 7 από 9

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000388586

Τίτλος

Κλωνοποίσηση, έκφραση και μερικός καθαρισμός πιθανών απακετυλασών χιτίνης από το λεπιδόπτερο Helicoverpa armigera

Άλλος τίτλος

Cloning expression and partial purification of putative chitin deacetylases of Helicoverpa armigera

Συγγραφέας

Μαρίνης, Δημήτρης Α.

Σύμβουλος διατριβής

Μπουριώτης, Βασίλης

Μέλος κριτικής επιτροπής

Βόντας, Ιωάννης
Πετράτος, Κυριάκος

Περίληψη

Στα πλαίσια ανάπτυξης καινοτόμων μέσων αντιμετώπισης των εντόμων που πλήττουν τις γεωργικές καλλιέργειες, μια σειρά ενζύμων αυτών των εντόμων έχουν στοχοποιηθεί. Η παρούσα εργασία αποτελεί τμήμα μιας ευρύτερης ερευνητικής προσπάθειας που εστιάζεται στην αξιολόγηση των απακετυλασών χιτίνης, ως στόχων νέων εντομοαπωθητικών και το σχεδιασμό ειδικών ενώσεων-αναστολέων για αυτά τα ένζυμα. Ως μοντέλο οργανισμός επιλέχθηκε το λεπιδόπτερο Helicoverpa armigera, ένα εξαιρετικά πολυφάγο είδος. Τα ένζυμα στόχοι της εργασίας αυτής είναι τρεις πιθανές απακετυλάσες χιτίνης HaCDA1, HaCDA5a, HaCDA5b, του λεπιδόπτερου H. armigera με σκοπό την υπερέκφραση, απομόνωση και βιοχημικό χαρακτηρισμό τους. Για κάθε γονίδιο πραγματοποιήθηκαν δύο πλασμιδιακές κατασκευές με και χωρίς το αντίστοιχο πεπτίδιο σινιάλο σε πλασμιδιακό φορέα έκφρασής (pET26b) κατάλληλο για μετασχηματισμό βακτηριακών κυττάρων E.coli. Ο μετασχηματισμός έλαβε χώρα σε 6 διαφορετικές κυτταρικές σειρές E.coli (BL21 (DE3) pLysS, BL21 star (DE3) pLysS, BL21 Codon Plus (DE3) RipL, C43 (DE3), Shuffle (DE3), BL21 star (DE3), PG-KJE8 BL2). Τα επίπεδα έκφρασης των ανασυνδιασμένων πρωτεϊνών ήταν σε πολύ χαμηλό επίπεδο ώστε να γίνει περαιτέρω απομόνωση και βιοχημικός χαρακτηρισμός τους και για αυτό το λόγο ακολούθησε προσπάθεια έκφρασής τους σε ευκαρυωτικό μικροοργανισμό και συγκεκριμένα στον ασκομύκητα Pichia pastoris . Οι μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις που λαμβάνουν χώρα στην P.pastoris βοηθούν στην καλύτερη έκφραση των πρωτεϊνών στόχου του έργου που είναι επίσης ευκαρυωτικής προέλευσης. Τα γονίδια hacda1, hacda5a, hacda5b κλωνοποιήθηκαν στον πλασμιδιακό φορέα pPICZalpha και ακολούθησαν πειράματα για την βελτιστοποίηση των συνθηκών καλλιέργειας. Ωστόσο τα επίπεδα έκφρασης παρέμειναν χαμηλά και για αυτό αποφασίστηκε η σύνθεση των γονιδίων (gene synthesis) από την εταιρία Genescript για βελτιστοποίηση των κωδικωνίων (codon optimization) που μπορεί να οδηγήσει σε καλύτερα επίπεδα έκφρασης

Φυσική περιγραφή

76 φύλλα : πίν., εικ ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Chitin

Strain X33

Στέλεχος Χ33

Χιτίνη

Ημερομηνία έκδοσης

2014-11-21

Συλλογή