E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης

Αρχική Αναζήτηση

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Εντολή Αναζήτησης : Συγγραφέας="Σιδηρόπουλος" Και Συγγραφέας="Πρόδρομος"

Τρέχουσα Εγγραφή: 8 από 34

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000442092

Τίτλος

Delineating molecular mechanisms of Dendritic cell/monocyte activation mediated by neutrophil extracellular traps underlying Rheumatoid Arthritis pathogenesis

Άλλος τίτλος

Διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών της ενεργοποίησης των μονοκυττάρων/δενδριτικών κυττάρων που διαμεσολαβούνται από εξωκυτταρικές παγίδες ουδετερόφιλων και συμβάλουν στην παθογένεια της Ρευματοειδούς Αρθρίτιδας

Συγγραφέας

Γωνιανάκη, Ειρήνη

Σύμβουλος διατριβής

Παπαδάκη, Γαρυφαλιά

Μέλος κριτικής επιτροπής

Σιδηρόπουλος, Πρόδρομος
Μπερτσιάς, Γεώργιος
Βεργίνης, Παναγιώτης

Περίληψη

Η ρευματοειδής αρθρίτιδα (ΡΑ) είναι μια χρόνια αυτοάνοση ασθένεια στην οποία εμπλέκονται πολλαπλοί κυτταρικοί τύποι και μονοπάτια. Η πολυπλοκότητα της ασθένειας σε συνδυασμό με την μη επιτυχή θεραπεία και τις υποτροπές των ασθενών επιδεικνύουν την ανάγκη για διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την ασθένεια. Τα ουδετερόφιλα αποτελούν τον πολυπληθέστερο τύπο λευκών αιμοσφαιρίων και είναι η πρώτη ομάδα κυττάρων που φτάνουν στην άρθρωση. Εκτός από την απελευθέρωση αρκετών φλεγμονωδών κυτταροκινών, τα ουδετερόφιλα απελευθερώνουν επίσης ίνες χρωματίνης που ονομάζονται εξωκυτταρικές παγίδες (ΝΕΤs). Μελέτες σε ασθενείς με ΡΑ έδειξαν αυξημένη αυτόματη απελευθέρωση NETs, γεγονός που υποδηλώνει το σημαντικό τους ρόλο στην παθογένεια της νόσου. Επιπλέον, προηγούμενη μελέτη του εργαστηρίου μας έδειξε ότι τα NETs που προέρχονται από ΡΑ ασθενείς παρουσίασαν αυξημένη δυνατότητα να προκαλέσουν ωρίμανση δενδριτικών κυττάρων (DCs) υγιών ατόμων. Μηχανιστικά, δείξαμε ότι η έκθεση των DCs σε NETs απομονωμένα από CIA προκάλεσε ωρίμανση των DCs η οποία χαρακτηρίστηκε από σημαντική αύξηση των CD80 και CD86 συνδιεγερτικών μορίων καθώς και αυξημένη έκκριση της φλεγμονώδους κυτταροκίνης IL-6. Ακόμη, τα DCs που ενεργοποιήθηκαν με CIA- NETs προκάλεσαν την ενεργοποίηση αντιγονο-ειδικών Th1 κυττάρων in vitro. Στην παρούσα μελέτη, ο κύριος στόχος μας ήταν να περιγράψουμε τους μηχανισμούς που εμπλέκονται στην ενεργοποίηση των DCs από τα NETs. Για το σκοπό αυτό, εστιάσαμε στα μονοκύτταρα καθώς θεωρούνται προγονικά κύτταρα των DCs που προέρχονται από μονοκύτταρα (moDCs) και παρουσιάζουν παρόμοιες ιδιότητες με τα πρώτα. Για να επιβεβαιώσουμε την υπόθεση μας, πρώτα, προκαλέσαμε απελευθέρωση των NETs ενεργοποιώντας υγιή ουδετερόφιλα με IgG αντισώματα που απομονώθηκαν από ορούς ενεργών ασθενών με ΡΑ και παρατηρήσαμε αυξημένη απελευθέρωση ΝΕΤs στα ουδετερόφιλα που ενεργοποιήθηκαν με IgG αντισώματα απομονωμένα από ασθενείς σε σχέση με εκείνα που απομονώθηκαν από υγιείς εθελοντές. Στη συνέχεια της μελέτης μας, εστιάσαμε στην επίδραση των NETs στην ενεργοποίηση των μονοκυττάρων. Όταν μετρήσαμε τα επίπεδα πρωτεΐνης των κυτταροκινών σε μονοκύτταρα που καλλιεργήθηκαν με NETs και παρατηρήσαμε αυξημένη έκφραση της προφλεγμονώδους κυτταροκίνης (TNF-α), ενδεικτική της ενεργοποίησης των μονοκυττάρων. Σύμφωνα με πρόσφατες δημοσιεύσεις, η επαγωγή της αυτοφαγίας φαίνεται να συνδέεται με την ενεργοποίηση των μονοκυττάρων. Γι’ αυτόν τον λόγο, εστιάσαμε στο μηχανισμό αυτοφαγίας των μονοκυττάρων. Τα μονοκύτταρα που καλλιεργήθηκαν με NETs, παρουσίασαν μειωμένη έκφραση του αυτοφαγικού δείκτη LC3 και αυξημένη έκφραση της p62 στη συνεστιακή μικροσκοπία. Επίσης, σύμφωνα με τη μέθοδο Western Blotting, τα επίπεδα της p62 έδειξαν ήπια αύξηση. Τα παραπάνω δεδομένα υποδηλώνουν μειωμένη αυτοφαγία. 8 Στη συνέχεια, προσπαθήσαμε να προσδιορίσουμε τα ενδοκυττάρια σήματα που ευθύνονται για την μείωση της αυτοφαγίας σε μονοκύτταρα που καλλιεργήθηκαν με NETs. Για να απαντήσουμε σε αυτό το ερώτημα, χρησιμοποιήσαμε τη μέθοδο της κυτταρομετρίας ροής για τους φωσφορυλιωμένους δείκτες του mTOR μονοπατιού, pmTOR και pAkt και τα κάτωθι μόρια του mTORC1 μονοπατιού pS6 και p4EBP1 σε μονοκύτταρα που καλλιεργήθηκαν με NETs και παρατηρήσαμε αυξημένη έκφραση του PI3K / Akt / mTOR άξονα.

Φυσική περιγραφή

35 σ. : εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Autophagy

Μονοκύτταρα

Ημερομηνία έκδοσης

2021

Συλλογή

Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης