Περίληψη |
Κεφάλαιο Ι: Οι μηχανισμοί σηματοδότησης των φυτών μπορεί να ενεργοποιηθούν από διάφορες μορφές
αβιοτικού στρες, οι οποίες κλιμακώνονται ολοένα και περισσότερο από την κλιματική αλλαγή. Η
NtRBP1, μια πλούσια σε γλυκίνες πρωτεΐνη που προηγουμένως είχε προταθεί πως προχωρά σε
αλλαγή φάσης σε συνθήκες θερμικής καταπόνησης, προτείνει μια πιθανή σύνδεση μεταξύ της
απόκρισης σε συνθήκες καταπόνησης και στο φαινόμενο αλλαγής φάσης. Ο σκοπός της
διπλωματικής μου εργασίας ήταν να διερευνήσω τις ιδιότητες της RBP1 που προωθούν την
αλλαγή φάσης σε συνθήκες στρες, ακολουθώντας (i) μια βιοπληροφορική προσέγγιση, για την
εκτίμηση της τάσης προς αλλαγή φάσης και τον εντοπισμό πιθανών μετα-μεταφραστικών
τροποποιήσεων, αντικαταστάσεων ή μοριακών αλλαγών που οδηγουν από ασταθή σε σταθερή
δομή και διαταράσσουν την αλλαγή φάσης (ii) μια προσέγγιση πρόκλησης σημειακών
μεταλλάξεων για τον in vitro χαρακτηρισμό αυτών των προβλέψεων και (iii) μια προσέγγιση
κυτταρικής βιολογίας, για να ερευνήσω πως ο διαχωρισμός φάσεων συνδέεται λειτουργικά με
την απόκριση στο στρες και πώς επηρεάζει τον υποκυτταρικό εντοπισμό της RBP1. Τα
αποτελέσματά μου έδειξαν ότι το μετάλλαγμα απώλειας σουμοϋλίωσης RBP1K
55R δεν προκάλεσε
σημαντικές διαφορές στον υποκυτταρικό εντοπισμό σε συνθήκες θερμικής και ψυχρής
καταπόνησης, ούτε επηρέασε το εναλλακτικό μάτισμα, αλλά απομονώθηκε μαζί με την RBP1 για
μεταγενέστερα in vitro πειράματα. Επιπλέον, βιοπληροφορικές αναλύσεις υπογράμμισαν την
τάση για αλλαγή φάσης και τη ομοιότητα της αμινοξικής της σύστασης με πράιονς . Τέλος,
υποκαταστάσεις που δείχνουν μετάβαση από ασταθή σε σταθερή δομή (RBP1
Y114F) ή και
επιπλέον συντηρημένες θέσεις φωσφορυλίωσης (RBP1
Y129F), έδειξαν ασυνήθιστα πρότυπα
υποκυτταρικού εντοπισμού σε συνθήκες θερμοκρασίας δωματίου και θερμικής καταπόνησης,
υπογραμμίζοντας την ανάγκη για περαιτέρω διερεύνηση της λειτουργικής τους επίδρασης.
Συνολικά, τα αποτελέσματά μου παρέχουν περαιτέρω πληροφορίες για τον τρόπο με τον οποίο
συνδέονται δυνητικά η αλλαγή φάσης και η απόκριση στο στρες, ενώυπογραμμίζουν τη σημασία
της βαθύτερης διερεύνησης των δομικών και λειτουργικών αλλαγών της RBP1.
Κεφάλαιο ΙΙ: Οι φωτοϋποδοχείς μπλε φωτός είναι απαραίτητοι για τις διαδικασίες σηματοδότησης στα φυτά,
ρυθμίζοντας την ανάπτυξη των φυτών για να επιτυγχάνουν τη βέλτιστη θέση για επιβίωση και
ανάπτυξη. Σύγχρονες φάρμες παραγωγής χρησιμοποιούν συσκευές εκπομπής φωτός με
προσαρμοσμένο φως για μεγιστοποίηση της απόδοσης, υπογραμμίζοντας τη σημασία της
αποκρυπτογράφησης του μηχανιασμού απόκρισης στο μπλε φως. Η παρούσα διπλωματική
εργασία στόχεψε στο να συμβάλει στην κατανόηση του τρόπου με τον οποίο η Κινεσίνη 7.3, μια
πρωτεΐνη που κινείται πάνω στους μικροσωληνίσκους, βρέθηκε να σχετίζεται με τον
φωτοϋποδοχέα του μπλε φωτός Φωτοτροπίνη 1 (PHOT1). Συγκεκριμένα, η διιπλωματική μου
εργασία συνδύασε δύο προσεγγίσεις (i) γενετικές μελέτες για να διερευνήσει τον αντίκτυπο και
τον μηχανισμό της απόκρισης της Φωτοτροπίνης 1 στο μπλε φως και (ii) πειράματα κυτταρικής
βιολογίας, για να μελετήσει την επίδραση της Κινεσίνης 7.3 στα πρότυπα κυτταρικού εντοπισμού
της Φωτοτροπίνης 1 και την αναδιοργάνωση των μικροσωληνίσκων. Τα αποτελέσματα έδειξαν
ότι οι φυτικές σειρές με μεταλλάξεις απώλειας λειτουργίας δεν κάμπονται στο μπλε φως, που
αποτελεί βασική φωτοτροπική απόκριση των φυτών. Επιπλέον, τα πρότυπα κατανομής της
Φωτοτροπίνης 1 στην κυτταρική μεμβράνη παρατηρήθηκαν επηρεασμένα από την έλλειψη της
Κινεσίνης 7.3 σε φυτικές σειρές PHOT1-GFP, παρουσιάζοντας αυξημένα επίπεδα έκφρασης στην
πλασματική μεμβράνη και πιθανή καθυστέρηση στην ενδοκύτωση του υποδοχέα. Επιπλέον, η
έλλειψη της Κινεσίνης φαίνεται να επηρεάζει την αναδιοργάνωση των μικροσωληνίσκων σε μπλε
φως, ώστε να μην επαναφέρονται από ένα διαμήκη σε ένα εγκάρσιο πρότυπο οργάνωσης που
προκαλείται από το μπλε φως. Σε συνδυασμό με πειραματικά στοιχεία που υποδηλώνουν ότι η
Κινεσίνη 7.3 επηρεάζει την φωσφορυλίωση της Φωτοτροπίνης 1, τα αποτελέσματα
αναδεικνύουν συλλογικά την συμμετοχή της Κινεσίνη 7.3 στην σηματοδότησης μέσω της
Φωτοτροπίνης 1.
|