E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης

Αρχική Αναζήτηση

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Εντολή Αναζήτησης : Συγγραφέας="Καρδάσης" Και Συγγραφέας="Δημήτριος"

Τρέχουσα Εγγραφή: 25 από 68

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000404259

Τίτλος

Investigation of the role of the HNF4a transcription factor in the pathogenesis of metabolic diseases using mouse models

Άλλος τίτλος

Διερεύνηση του ρόλου του μεταγραφικού παράγοντα HNF4a στη παθογένεση των μεταβολικών ασθενειών

Συγγραφέας

Σκέντερης, Νικόλαος Ταξιάρχης

Σύμβουλος διατριβής

Καρδάσης, Δημήτριος

Μέλος κριτικής επιτροπής

Τσατσάνης, Χρήστος
Μπερτσιάς, Γεώργιος

Περίληψη

Το Μεταβολικό Σύνδρομο είναι ένα σύμπλεγμα από ασθένειες συμπεριλαμβανομένων της παχυσαρκίας, τη υπέρτασης, της δυσλιπιδαιμιας (υπερτιγλυκεριδαιμίας συνδιασμένης από χαμηλά επίπεδα υψηλής πυκνότητας λιποπρωτείνης (HDL) και υψηλά επίπεδα χαμηλής πυκνότητας λιποπρωτείνης (LDL) διαταραγμένη ανοχή στη γλυκόζη ή αντίσταση στην ινσουλίνη που όλα μαζί αυξάνουν τον κίνδυνο για ανάπτυξη καρδιολογικών νοσημάτων. Η αιτιολογία του Μεταβολικού Συνδρόμου παραμένει άγνωστη και πιο αποτελεσματικές θεραπείες για την αντιμετώπιση της νόσου είναι επιτακτικό να ανακαλυφθούν. Το λιπώδες ήπαρ που οφείλεται σε μη αλκοολική κατανάλωση είναι μία ακόμα ασθένεια που προκαλεί την εκτεταμένη συγκέντρωση λιπώδους ιστού στο ήπαρ των ασθενών. Έχει διατυπωθεί από την επιστημονική κοινότητα πώς το λιπώδες ήπαρ είναι μια συνέπεια του Μεταβολικού Συνδρόμου στο ήπαρ. Ο ηπατικός μεταγραφικός παράγοντας 4 άλφα (HNF4α) είναι μέλος των ορμονικών πυρηνικών υποδοχέων της υπεροικογένειας των μεταγραφικών παραγόντων και εκφράζεται σε υψηλά επίπεδα στο ήπαρ, στο έντερο, στους νεφρούς και στο πάγκρεας. Σημειακές μεταλλάξεις στο γονίδιο του HNF4A είναι υπεύθυνες για την ανάπτυξη και εκδήλωση του πρώιμου ώριμου διαβήτη σε νεαρά άτομα. Επίσης, σημειακές μεταλλάξεις στο γονιδιακό τόπο του συγκεκριμένου γονιδίου έχουν συσχετιστεί, με τη χρήση γονιδιακών μελετών συσχέτισης, με μειωμένα επίπεδα υψηλή πυκνότητας χοληστερόλης. Σε ποντίκια, ο μεταγραφικός παράγοντας HNF4α είναι υπεύθυνος για την ανάπτυξη του ήπατος και ελέγχει την έκφραση πολλών γονιδίων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό των λιποπρωτεινών. Κύριος στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση του ρόλου του μεταγραφικού παράγοντα HNF4α στην παθογένεση μεταβολικών ασθενειών και συγκεριμένα του Μεταβολικού Συνδρόμου και του λιπώδους ήπατος. Για την επίτευξη του στόχου, δύο στελέχη ποντικών χρησιμοποιήθηκαν. α) το APOE*3Leiden.CETP διαγονιδιακό στέλεχος ποντικού, το οποίο είναι ένα πολύ καλα χαρακτηρισμένο μοντέλο για την μελέτη του επαγώμενου από τη δίαιτα Μεταβολικού Συνδρόμου και β) το μοντέλο ποντικού όπου ο μεταγραγικός παράγοντας HNF4α έχει αποσιωποιηθεί στοχευμένα στο ήπαρ του (HNF4α Liver KO). Ποντίκια στα οποία ο μεταγραφικός παράγοντας HNF4a δεν εκφράζεται στο ήπαρ τους εμφανίζουν εκτεταμένη συσσώρευση λιπιδίων (τριγλυκεριδίων και χοληστερόλης) στο ήπαρ τους και μπορούν να χρησιμοποιηθούν σαν μοντελο για τη μελέτη του λιπώδους ήπατος που οφείλεται στην μη κατανάλωση αλκοόλης. Το πρώτο βήμα για την επίτευξη του στόχου ήταν ο σχεδιασμός τριών διαφορετικών «μικρών φουρκετών RNA» (shRNA) που στοχεύουν σε διαφορετικά σημεία το ώριμο μετάγραφο του γονιδιου HNF4A. Το shRNA που εξάλειφε πιο αποδοτικά την παραγωγή του μεταφραγικού παράγοντα HNF4α εισήχθη σε ειδικό πλασμιδιακό φορέα κάτω από τον έλεγχο των εκκινητών H1 και U6. Στη συνέχεια οι πλασμιδιακές κατασκευές πακεταριστηκαν μέσα σε Αδενο-συσχετιζόμενου ιούς (AAVs). Σε επόμενο βήμα οι ιοι AAV-shHNF4α μαζί με τους αντίστοιχους ιούς ελέγχου, θα εισαχθούν στα ποντίκια APOE*3Leiden.CETP όπου θα προκαλέσουν στοχευμένη αποσιώπιση του μεταγραφικού παράγοντα HNF4a στο ήπαρ των ποντικών αυτών. Τα μολυσμένα με τους ιούς ποντίκια θα εισαχθούν σε ειδική δίαιτα για την επαγωγή του Μεταβολικού Συνδρόμου και στη συνέχεια θα πραγματοποιηθεί εκτεταμένη φαινοτυπική και μεταγραφική ανάλυση των ποντικών αυτών. Επίσης, μεταγραφική ανάλυση ήπατος ποντικιών που όπου ο μεταγραγικός παράγοντας HNF4α είχε αποσιωποιηθεί στο ήπαρ HNF4α Liver KO, πραγματοποιήθηκε στο εργαστήριο και αποκάλυψε σημαντικές μεταβολές στα επίπεδα έκφρασης διάφορων γονιδίων που εμπλέκονται στη βιοσύνθεση και το μεταβολισμό λιπιδίων και απολιποπρωτεινών. Στόχος ήταν η πιστοποίηση νέων γονιδίων χωρίς καθορισμένο ρόλο στο μονοπάτι μεταβολισμού της υψηλής πυκνότητας απολιποπρωτείνης που βρέθηκε ότι έχουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης και πιθανόν είναι στόχοι του μεταγραφικού παράγοντα HNF4a. Επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων από τις μικροσυστοιχίες πραγματοποιήθηκε με τις τεχνικές «αντίστροφης μεταγραφάσης ποσοτικοποιημένη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης» (RT-qPCR) καθώς και με ανοσοκατακρήμνιση χρωματίνης από δείγματα ήπατος των ποντικών αυτών με απώτερο στόχο την διερεύνηση θέσεων πρόσθεσης του μεταγραφικού παράγοντα HNF4a στους εκκινητές των νέων γονιδίων. Συμπερασματικά, με τη χρήση ποντικών μοντέλων διερευνήθηκε ο ρόλος του μεταγραφικού παράγοντα HNF4α στην παθογένεση μεταβολικών ασθενειών όπως του Μεταβολικού Συνδρόμου και του λιπώδους ήπατος από τη μη κατανάλωση αλκοόλ, καθώς και ο προσδιορισμός νέων γονιδίων στόχων του μεταγραφικού παράγοντα. Τα αποτελέσματα της έρευνας θα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό καινούριων θεραπευτικών σκευασμάτων που θα μπορούσαν να εξερευνηθούν περαιτέρω στο μέλλον για την αντιμετώπιση και θεραπεία των ασθενειών αυτών.

Φυσική περιγραφή

82 σ. : εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Metabolic syndrome

Καρδιολογικές ασθένειες

Μεταβολικό σύνδρομο

Ημερομηνία έκδοσης

2016-12-13

Συλλογή

Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης