E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Μελέτη των πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου IV της Coxiella Burnetii

Αρχική Μελέτη των πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου IV της Coxiella Burnetii

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000403907

Τίτλος

Μελέτη των πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου IV της Coxiella Burnetii

Άλλος τίτλος

Study of proteins of the secretion system type IV of Coxiella Burnetii

Συγγραφέας

Μαθιουδάκη, Ειρήνη Κ.

Σύμβουλος διατριβής

Τσιώτης, Γεώργιος

Μέλος κριτικής επιτροπής

Γανωτάκης, Δημήτριος
Ψαρουλάκη, Άννα

Περίληψη

Η Coxiella burnetii είναι ένα υποχρεωτικά ενδοκυττάριο βακτήριο, το οποίο προκαλεί τον πυρετό Q στον άνθρωπο και σε άλλα θηλαστικά ζώα. Μελέτες στο συγκεκριμένο βακτήριο έχουν δείξει πως, για την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό του στο κύτταρο ξενιστή, εξειδικευμένες μοριακές μηχανές συμβάλουν μέσω μεταφοράς συγκεκριμένων πρωτεϊνικών μορίων, τα οποία επεμβαίνουν στις κυτταρικές διεργασίες του ξενιστή με αποτέλεσμα την εγκαθίδρυση της μόλυνσης. Μία τέτοια μοριακή μηχανή είναι το εκκριτικό σύστημα τύπου IVB (T4BSS), γνωστό και ως σύστημα Dot/Icm, που μεταφέρει πρωτεΐνες από το βακτήριο στη κύτταρο ξενιστή. Το συγκεκριμένο εκκριτικό σύστημα έχει μελετηθεί σε βάθος στο βακτήριο Legionella pneumophilia και έχει βρεθεί πως απαρτίζεται από 27 πρωτεΐνες, 24 από τις οποίες ταυτοποιούνται σε στέλεχος της C.burnetii. Στην συγκεκριμένη εργασία, μελετώνται 4 πρωτεΐνες από το εκκριτικό σύστημα T4BSS της C.burnetii, όπως επίσης και το υποσύμπλοκο του πυρήνα που απαρτίζεται από τις DotC, DotD, IcmG (DotF), IcmE (DotG) και IcmK (DotH). Οι πρωτεΐνες που μελετώνται είναι η IcmK της εξωτερικής μεμβράνης, η IcmE του περιπλάσματος, η DotC και η DotD. Αρχικά, ελέγχθηκε η ικανότητα έκφρασης των παραπάνω πρωτεϊνών στα στελέχη E.Coli C43(DE3) χρησιμοποιώντας τους πλασμιδιακούς φορείς pttQ18A2 και pttQ18C3. Ο πρώτος πλασμιδιακός φορέας έφερε το γονίδιο της εκάστοτε πρωτεΐνης με σήμανση την ουρά 6 ιστιδινών στο κάρβοξυ-τελικό άκρο, ενώ ο δεύτερος έφερε ως σήμανση ένα μικρό πεπτίδιο 8 αμινοξέων (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys), που ονομάζεται strep-tag, επίσης στο κάρβοξυ- τελικό άκρο της αμινοξικής αλληλουχίας της πρωτεΐνης. Με τον τρόπο αυτό, ήταν εφικτή η απομόνωση της εκάστοτε πρωτεΐνης με χρωματογραφία συγγενείας και πιο συγκεκριμένα με τη χρήση στήλης νικελίου και στρεπταβιδίνης, για κάθε μία από τις παραπάνω περιπτώσεις αντίστοιχα. Στη συνέχεια, ακολούθησε καθαρισμός της πρωτεΐνης στόχου με χρωματογραφία μοριακού αποκλεισμού. Η επιτυχής απομόνωση,ο καθαρισμός και η ταυτοποίηση των επιθυμητών πρωτεϊνών με φασματομετρία μάζας, ανοίγει τον δρόμο για το δομικό τους χαρακτηρισμό με την μέθοδο της ηλεκτρονικής μικροσκοπίας ή της κρυσταλλογραφίας. Η μελέτη των εκκρινόμενων πρωτεϊνών του παθογόνου βακτηρίου Coxiella burnetii έχει πολύ μεγάλη σημασία με ενδεχόμενες εφαρμογές στην ιατρική, δεδομένου πως τα συγκεκριμένα πρωτεϊνικά μόρια συμβάλουν στην ανάπτυξη του βακτηρίου μέσα στο κύτταρο ξενιστή, αποτελώντας μόρια-στόχους για την ανάπτυξη φαρμάκων.

Φυσική περιγραφή

147 σ. : πίν., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Affinity chromatography

Electrophoresis

IVB secretorion system

Mass spectrometry

Membrane proteins

Molecular exclusion chromatography

Q fever